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一、稀釋涂布平板法操作步驟
1、根據(jù)目標(biāo)菌株查找相關(guān)的培養(yǎng)信息(這個步驟盡量多采用幾種培養(yǎng)方法),將不同的培養(yǎng)基分別配置成固體平板,將樣本進行梯度稀釋(如下圖1所示)。
2、從10倍稀釋的試管中吸取1ml稀釋液,注入102倍稀釋的試管中,重復(fù)第2步的混勻操作。依次類推,直達完成更后一支試管的稀釋。注:移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時,試管口和移液管應(yīng)在離火焰的1~2cm處。
3、稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步?!疾襟E〗將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。取少量菌液,滴加到培養(yǎng)基表面。
4、挑取單一個菌落, 一般再重復(fù)該法1-2次, 結(jié)合顯微鏡檢測個體形態(tài)特征,便可得到真正的純培養(yǎng)物。若樣品稀釋時能充分混勻,取樣量和稀釋倍數(shù)準(zhǔn)確,則該法還可用于活菌數(shù)測定。
5、平板劃線法:通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到得到單菌落。
6、融化培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基放入水浴中加熱至融化。 倒平板:待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右,按無菌操作法倒2只平板(每皿約15m,平置,待凝固。
二、稀釋涂布平板法包括哪兩種操作
1、稀釋涂布平板法 概念將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時,即可獲得單個細菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。
2、總結(jié) 稀釋涂布平板法是一種簡單、易行、成本低廉、適用范圍廣泛的微生物計數(shù)方法。在實驗室準(zhǔn)備工作、樣品處理、制備平板、制備稀釋液、涂布操作和計數(shù)和統(tǒng)計等方面需要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程和標(biāo)準(zhǔn)操作程序,以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
3、稀釋平板法又分為平板表面涂布法和澆注平板法兩種。無論哪種方法都是先將含菌樣品用無菌水做一系列的10倍稀釋,制成菌懸液,讓其中的微生物細胞充分分散至單細胞,然后令其在平板培養(yǎng)基上生長并獲得由單個細胞繁殖成的單菌落。
4、稀釋涂布平板法具體操作如下:將分別盛有9ml水的6支試管滅菌,并按10到1到10到6的順序進行編號。用移液試管吸取1ml培養(yǎng)的菌夜,注入10到1倍稀釋的試管中。用手指輕壓移夜管上的橡皮,吹吸三次。使菌液與水充分混勻。
5、不同的方法涂布平板法:將待測樣品制成均勻的系列稀釋液,盡量分散樣品中的微生物細胞,使其以單細胞形式存在。然后取一定的稀釋液和一定量的稀釋液接種到平板上,使其在平板內(nèi)的培養(yǎng)基中均勻分布。
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